春季角结膜炎(VKC)是一种罕见的IgE和非IgE介导的眼部过敏，影响生活在温暖气候中的儿童和年轻成人。它可能是严重的，并且可能因为频繁的角膜受累而导致永久性视力残疾。TNF-α已被证明定位于结膜肥大细胞，在VKC患者的泪液和结膜组织中增加。TNF-α通过上调黏附的表达增加炎性细胞流入结膜分子和趋化因子以及激活角膜和结膜细胞。自噬是不同物种的生理保守机制，它负责通过再循环维持细胞内稳态，并通过双膜自噬体将错误折叠或未折叠的蛋白质和受损的细胞器递送至溶酶体。自噬是一个主动的多步骤过程，开始于吞噬细胞形成，结束于自噬体-一些递送到溶酶体（自噬溶酶体）。整个过程被称为自噬通量，它可以通过使用氯喹(CQ)等化学抑制剂来抑制。微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)A和B、LC3BII/LC3BI比值、Beclin-1、溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)、货物接头序列体-1/泛素结合蛋白p62(p62)是自噬的典型标志物。LC3脂化（即游离LC3-I转化为LC3-II）是表明细胞自噬通量的关键。
研究结果1、自噬标志物在VKC中显著表达
对活动性VKC患者和健康对照者的上睑结膜活检标本进行免疫组织化学处理和定量PCR(qPCR)分析，发现VKC结膜组织中Beclin-1、LC3B、组织蛋白酶D和P62的表达显著高于对照组。
2、细胞自噬标志物LC3的增加
用10ng/mL的TNF-a在含1%ITS的DMEM中处理VKC-CFs4、10和24小时。处理的VKC-CFs(T)在4和10小时通过免疫荧光增加LC3染色。
3、炎症因子在VKC-CFs中的作用
将VKC-CFs暴露于活化的U单核细胞的条件培养基中，发现在治疗的VKC-CFs中，LC3B、LC3A、p62和组织蛋白酶D与非活化细胞相比显著增加。
TNF-α没有改变Beclin-1或LAMP1的水平，而与时间匹配的对照(qPCR)相比，它显著增加了LC3B和p62的水平。
4、TNF-α调节VKC-CFs自噬通量
自噬蛋白的表达
分析了VKC-CFs培养物中自噬蛋白的表达，发现TNF-a显著增加了LC3BI和LC3BII表达水平以及LC3BII/LC3BI比值，而Beclin-1和组织蛋白酶D水平未改变。
自噬的抑制
VKC-CFs在存在氯喹(+CQ)的情况下用10ng/mLTNF-α处理。CQ显著降低24hLC3BI的表达，并显著单独增加4、24h时LC3BII的表达。表明TNF-α调节结膜成纤维细胞的细胞自噬通量。
溶酶体消化
双重免疫荧光强调了在TNF-α暴露后，LAMP1和活化的组织蛋白酶D在溶酶体内的表达和共区域化增加，而在细胞质中没有。提示组织蛋白酶D参与自噬货物的溶酶体消化。
研究结论自噬受促炎性细胞因子TNF-α的调节，TNF-α增加VKC-CFs培养物中蛋白LC3BI和蛋白LC3BII的表达以及LC3BII/LC3BI比值，表明TNF-α调节结膜成纤维细胞的细胞自噬通量。由于自噬诱导可能抑制TNF-α的释放，从而减轻炎症反应，所以自噬的特异性诱导剂可能对抗TNF-α治疗也适用。
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